pPIC3.5质粒载体图谱序列抗性说明书价格Biovector公司

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标

载体基本信息

出品公司:载体名称:质粒类型:表达水平:启动子:克隆方法:载体大小:5' 测序引物及序列:3' 测序引物及序列:载体标签:载体抗性:筛选标记:备注:产品目录号:稳定性:组成型:病毒/非病毒:

Invitrogen

pPIC3.5, pPIC 3.5

毕赤酵母蛋白表达载体

高拷贝

AOX1

多克隆位点，限制性内切酶

7751 bp

5´ AOX1:5´-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3´

3´ AOX1:5´-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3´

Ampicillin

HIS4

插入基因是必需包含起始密码子ATG。

K1710-01

稳定 Stable

组成型 Constitutive

非病毒

载体质粒图谱和多克隆位点信息

pPIC3.5载体图谱

载体简介

pPIC3.5酵母表达载体详细信息如下:

1. 载体大小为7,751 bp，是非融合蛋白表达载体。

2. 单一限制性内切酶位点有BamH I, SnaB I, EcoR I, Avr II 和Not I.

3. 胞内基因表达载体，不是分泌性蛋白表达载体。

4. 载体构建时，需要包含一个ATG启动子，同时需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990)

5. 毕赤酵母中使用HIS4基因筛选。

6. 将基因插入GS115和KM71的AOX1中，需要使用Sac I线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+，KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)。

7. 将基因插入GS115和KM71的HIS4中，需要使用Sal I或 Stu I线性化质粒(GS115产生的基因型为His+ Mut+，KM71酵母产生的基因型为His+ MutS)。

8. 将基因插入GS115的AOX1基因中，也可以使用Bgl II 限制酶线性化质粒，产生的酵母基因型为His+ MutS。

载体序列

LOCUS      pPIC3.5          7751 bp    ds-DNA    circular SYN 05-二月-2013
DEFINITION Pichia pastoris HIS4 vector for methanol-inducible intracellular
            expression of a protein.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pPIC3.5
COMMENT     This file is created by Vector NTI
            http://www.biofeng.com/
COMMENT     VNTAUTHORNAME|biofeng.com|
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..7751
                     /organism="synthetic DNA construct"
                     /lab_host="Pichia pastoris"
                     /mol_type="other DNA"
     promoter        2..937
                     /gene="Pichia pastoris AOX1"
                     /note="AOX1 promoter"
                     /note="inducible promoter, regulated by methanol"
                     /note="color: #ffffff; direction: RIGHT"
     misc_feature    938..969
                     /note="MCS"
                     /note="multiple cloning site"
                     /note="color: #99ccff"
     terminator      1049..1295
                     /gene="Pichia pastoris AOX1"
                     /note="AOX1 terminator"
                     /note="transcription terminator for AOX1"
                     /note="color: #ffffff"
     CDS             complement(1708..4242)
                     /codon_start=1
                     /gene="Pichia pastoris HIS4"
                     /locus_tag="
                     "
                     /product="multifunctional enzyme, required for histidine
                     biosynthesis"
                     /note="PpHIS4"
                     /note="auxotrophic marker for Pichia pastoris"
                     /note="color: #ff7f50"
                     /protein_id="
                     "
                     /translation="MTFPLLPAYASVAEFDNSLSLVGKAVFPYAADQLHNLIKFTQSTE
                     LQVNVQVESSVTEDQFEELIDNLLKLYNNGINEVILDLDLAERVVQRMIPGARVIYRTL
                     VDKVASLPANASIAVPFSSPLGDLKSFTNGGSRTVYAFSETAKLVDVTSTVASGIIPII
                     DARQLTTEYELSEDVKKFPVSEILLASLTTDRPDGLFTTLVADSSNYSLGLVYSSKKSI
                     PEAIRTQTGVYQSRRHGLWYKGATSGATQKLLGIELDCDGDCLKFVVEQTGVGFCHLER
                     TSCFGQSKGLRAMEATLWDRKSNAPEGSYTKRLFDDEVLLNAKIREEADELAEAKSKED
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                     KEVPSEGRIELCKIDVSKASSQEIEDALRRPIQKTEQIMELVKPIVDNVRQNGDKALLE
                     LTAKFDGVALKTPVLEAPFPEELMQLPDNVKRAIDLSIDNVRKFHEAQLTETLQVETCP
                     GVVCSRFARPIEKVGLYIPGGTAILPSTSLMLGVPAKVAGCKEIVFASPPKKDGTLTPE
                     VIYVAHKVGAKCIVLAGGAQAVAAMAYGTETVPKCDKIFGPGNQFVTAAKMMVQNDTSA
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                     AVHNQAVQLPRVEIVRKCIAHSTTLSVATYEQALEMSNQYAPEHLILQIENASSYVDQV
                     QHAGSVFVGAYSPESCGDYSSGTNHTLPTYGYARQYSGVNTATFQKFITSQDVTPEGLK
                     HIGQAVMDLAAVEGLDAHRNAVKVRMEKLGLI"
     misc_feature    4597..5353
                     /note="AOX1 3' fragment"
                     /note="region downstream of Pichia pastoris AOX1 gene"
                     /note="color: #ffffff"
     rep_origin      complement(5822..6410)
                     /direction=LEFT
                     /note="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
                     /note="color: #ffff00"

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