BioVector® Saccharomyces cerevisiae 23344c 酵母氮源代谢与转运研究模式菌株 / BioVector® Saccharomyces cerevisiae Yeast Strain 23344c

1 菌株基本信息与生理表型 / Yeast Strain Identification and Phenotypic Profiling

• 菌株名称 (Strain Name)：BioVector® Saccharomyces cerevisiae 23344c 模式菌株。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Line Designations)：

  • 23344c

  • S. cerevisiae 23344c

  • Sigma 1278b (Σ1278b) Derivative Strain 23344c

  • BioVector® 23344c Yeast Reference Strain

• 种属与基因型背景 (Species & Genotype Architecture)：真核生物界，真菌门，酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），属于单倍体遗传背景（经典 Σ1278b 衍生系），基因型包含 $MAT\mathbf{a}\ ura3-52$ 及其特异性氮源转运蛋白基因缺陷（如 gap1 通用氨基酸透过酶缺失或 mep1 mep2 mep3 铵盐转运缺陷调控系）。

• 

• 形态与生理表型 (Morphology & Physiological Profile)：典型出芽酵母形态（Budding Yeast）。椭圆形至圆形单细胞，单倍体，在 YPD 或合成完全（SC）平板上形成乳白色、边缘整齐、表面光滑湿润的酵母菌落；倍增时间在富集培养基中约为 90–120 分钟。

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：1 级安全控制（BSL-1，适用于酵母分子遗传学、质膜转运蛋白功能研究、TORC1 信号通路调控及氮源分解代谢产物阻抑机制评估）。

2 氮源转运机制与分子遗传学研究价值 / Nitrogen Metabolism and Transport Research Value

BioVector® S. cerevisiae 23344c 是研究真核生物膜转运蛋白调控与细胞营养感应的经典酵母遗传学工具菌株：

The BioVector® S. cerevisiae 23344c yeast strain serves as a fundamental model for studying eukaryotic membrane transporter trafficking, nitrogen catabolite repression (NCR), and nutrient-sensing signal transduction pathways:

质膜转运蛋白与 TOR 信号通路研究 (Membrane Transporters & Nutrient Sensing)

• 透过酶（Permease）内吞与降解调控：23344c 具备明确的氮源转运蛋白缺陷背景，广泛用于研究普通氨基酸透过酶 Gap1p 或铵盐转运体 Mep1p/Mep2p/Mep3p 在富氮（如铵盐、谷氨酰胺）与贫氮（如脯氨酸、尿素）条件下的泛素化修饰、内吞及液泡降解机制。

• TORC1 信号通路与假菌丝发育：作为 Σ1278b 遗传背景衍生株，可用于评估不同氮源质量对 TORC1 激酶复合物活性的调控，以及贫氮诱导下的二倍体假菌丝（Pseudohyphae）生长或单倍体侵入性生长表型。(Provides a clean genetic baseline for nutrient-regulated membrane transport assays, plasmid complementation, and eukaryotic metabolic pathway engineering.)

3 培养基配方与维持培养规范 / Culture Formulations and Maintenance

核心营养选择与筛选规程 / Selective Media & Nitrogen Source Control Notice

23344c 菌株含有 ura3-52 营养缺陷型标志，转化为质粒重组体后需使用合成缺尿嘧啶培养基（SC-Ura）进行加压筛选；在研究特定氮源转运机制时，必须使用无氨基酸和硫酸铵的 YNB 基础培养基（YNB without amino acids and ammonium sulfate），并以特定单一氮源（如 0.1% Proline 或 0.1% Urea）进行定性补加。(Maintain plasmid selection on SC dropout media; assess nitrogen transport phenotypes using minimal YNB media supplemented with defined single nitrogen sources at 28–30 °C.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete & Selective Growth Media Formulations

• 1. 高品质酵母完全富集培养基 (BioVector® YPD Complete Medium)：

  • BioVector® Yeast Extract（酵母浸粉）：1%

  • BioVector® Peptone（蛋白胨）：2%

  • D-Glucose（无水葡萄糖）：2%

• 2. 营养缺陷与氮源选择性培养基 (BioVector® Synthetic Minimal / Drop-Out Medium)：

  • BioVector® YNB Base（不含氨基酸与硫酸铵）：0.17%

  • D-Glucose（无水葡萄糖）：2%

  • 指定氮源（如 Proline 或 Ammonium Sulfate）：0.1%–0.5%

  • BioVector® SC Drop-Out Amino Acid Supplement（缺尿嘧啶或按需补充）：按标准比例配制

• 3. 固体琼脂平板 (Solid Agar Plates)：含 2% 琼脂粉（Agar）

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：液体摇床震荡培养（200 rpm）或固体平板倒置培养，运行工作温度精密锁定在 28–30 摄氏度（切勿超过 37 摄氏度以防热休克与表型异常）。

4 菌种复苏、划线接种与超低温保藏工作流 / Subculturing and Preservation Workflows

A 阶段：甘油菌的无菌划线复苏 / Phase A: Recovery from Cryovial

1. 从 $-80^\circ\text{C}$ 冰箱或液氮中移出 BioVector® 23344c 甘油冻存管，置于冰上融化。

2. 使用无菌接种环挑取少许菌液，在 YPD 或 SC 琼脂平板上进行三段划线。

3. 置于 28–30 摄氏度恒温培养箱 中倒置培养 48 小时，直至形成清晰独立的酵母菌落。

B 阶段：液体扩增与基因型验证 / Phase B: Liquid Culture & Genotype Validation

1. 挑取典型的单菌落接种至 5 mL BioVector® YPD Complete Broth 或 SC 选择性液体培养基中。

2. 28–30 摄氏度、200 rpm 摇动培养 16–24 小时至对数生长盛期（$\text{OD}_{600} \approx 0.8\text{--}1.5$）。

3. 取样测定营养缺陷型标记及特定氮源利用表型。

C 阶段：超低温甘油菌种保藏 / Phase C: Glycerol Stock Preparation

1. 取对数生长盛期的纯化酵母菌液。

2. 按 1:1 体积比与 BioVector® 30% 无菌甘油保藏液 混合均匀（终甘油浓度 15%）。

3. 分装至无菌冻存管中，直接置于 $-80^\circ\text{C}$ 超低温冰箱长期保存。

5 ITS/18S rDNA 鉴定、氮源转运缺陷表型（符合率 $\ge 99.0\%$）与一票否决质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

菌种基因组 ITS/18S rDNA 与同源性鉴定 (Genomic & Species Authentication)

必须使用 BioVector® Yeast ITS Sequencing Kit 扩增 ITS1-5.8S-ITS2 区域，测序结果必须与 GenBank 中 Saccharomyces cerevisiae 标准序列 100% 匹配，完全排除其他假丝酵母或细菌污染。

氮源转运缺陷表型与纯度（符合率 $\ge 99.0\%$）一票否决制质控红线 (Quality Control Gatekeeper)

为了阻断由于长期传代致使酵母基因组自发突变、回复突变（Reversion）、质粒丢失或细菌/霉菌污染致使分子遗传学实验失效的灾难性后果，质控部门必须执行硬性的“表型与纯度 Identity”一票否决制质控：

1. 无杂菌与真菌纯度红线：平板划线及显微镜检必须 100% 为酿酒酵母出芽形态，细菌涂片显微镜检与 PCR 支原体/细菌检测严格为 100% 阴性。

2. 营养缺陷型与氮源利用表型质控红线（核心考核）：点样于无尿嘧啶选择性平板及不同氮源平板上，营养缺陷型表达与氮源转运利用表型与靶向基因型符台率必须严格大于或等于 $99.0\%$。

3. 一票否决处理规范：一旦质控检测发现菌株发生回复突变（如失去 ura3-52 缺陷）、氮源利用表型漂移或检出细菌污染，该批次菌株执行一票否决红线制，彻底高压灭菌销毁（121 摄氏度，20 分钟）。绝对禁止将表型漂移的菌株投入科研与工程构建。必须立刻重新复苏原始极低代次的 BioVector® S. cerevisiae 23344c 种子冻存管。(Enforce a rigid functional gatekeeper: S. cerevisiae 23344c reference stocks must strictly verify 100% ITS sequencing identity, zero bacterial contamination, paired with an auxotrophic and nitrogen-utilization phenotype compliance rate $\ge 99.0\%$. Any reversion or contamination triggers an immediate system veto to destroy running lots instantly.)

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

电话:400-800-2947

工作QQ/微信同号:1843439339

E-mail:BioVector@163.com

网址http://www.biovector.net