BioVector® Escherichia coli HS996 基因工程克隆菌株 / BioVector® Escherichia coli Strain HS996

1 菌株基本信息与基因型表型 / Bacterial Strain Identification and Genotype Profiling

• 菌株名称 (Strain Name)：BioVector® Escherichia coli HS996 克隆/电转化感受态菌株。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Line Designations)：

  • E. coli HS996

  • HS996 Electrocompetent / Chemically Competent Cells

  • BioVector® HS996 High-Efficiency Cloning Host

• 宿主基因型 (Full Genotype)：F−ϕ80lacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169recA1endA1hsdR17(rK−,mK+)phoAsupE44thi-1gyrA96relA1tonA。

• 主要基因功能解释 (Key Genetic Features)：

  • recA1/endA1：重组酶与内切酶 A 缺陷，确保质粒 DNA 拷贝的高度稳定性及提纯 DNA 的极高质量。

  • hsdR17(rK−,mK+)：限制性核酸内切酶缺陷，允许外源甲基化或未甲基化 DNA 高效转化。

  • ϕ80lacZΔM15：支持蓝白斑筛选（α-互补机制）。

  • tonA/fhuA：抗 T1、T5 及 ϕ80 噬菌体感染保护。

• 形态与生长表型 (Morphology & Growth Profile)：革兰氏阴性短杆菌（Gram-negative rod）。在 LB 固体平板上呈现光滑、边缘整齐的白色/乳白色菌落，在 37∘C 下摇晃培养加倍时间约 20–30 分钟。

Escherichia coli HS996 Bacterial Cell Morphology. Source: BSIP / Universal Images Group via Getty Images

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：1 级安全控制（BSL-1，高效率常规克隆、文库构建及大质粒/BAC 转化专用）。

2 分子克隆机制与高效率转化优势 / Molecular Dynamics and High-Efficiency Transformation Value

BioVector® E. coli HS996 是由 DH10B / MC1061 衍生优化的高效率分子克隆宿主菌株：BioVector® E. coli HS996 is an optimized K-12 derivative highly suited for large plasmid transformation, BAC library construction, and high-efficiency electrotransformation:

高效率转化与文库构建优势 (Cloning & Transformation Benchmark)

• 超高转化效率 (Ultra-High Efficiency)：电转化感受态效率可达 $\ge 1\times 10^9\text{cfu/}\mu \text{g pUC19 DNA}$，化学感受态效率升至 $\ge 1\times 10^8\text{cfu/}\mu \text{g}$。

• 大片段 DNA 容纳能力 (Large-Construct Capacity)：对长片段连接产物及大质粒/文库载体具有优异的转化耐受度。(Serves as an ideal host for complex ligation mixtures, genomic libraries, and routine plasmid propagation.)

3 菌株完全培养基配方与无抗选育规范 / Culture Formulations and Growth Conditions

核心红线规程 / No Antibiotics Selection Baseline Notice原始 HS996 基因型不携带外源抗性标记（无 Amp/Kan/Tet/Spec 等抗性）。日常扩增备制感受态时必须使用无抗 LB 培养基；转化后需根据质粒所带抗性加入对应抗生素筛选平板。(Cultivate the base strain strictly without antibiotics; select with appropriate antibiotics only after transformation with resistance-bearing plasmids.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete Media Formulations

• 1. 高品质液体培养基 (BioVector® Complete LB/SOC Medium)：

  • BioVector® LB Base Broth（LB 基础肉汤，用于常规扩增）

  • BioVector® SOC Outgrowth Medium（SOC 复苏培养基，用于转化后复苏）

• 2. 固体筛选平板 (Solid Assay Plates)：

  • BioVector® Solid LB Agar Plate with X-Gal/IPTG（用于蓝白斑筛选）

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：摇床震荡培养（200–250 rpm），运行工作温度精密锁定在 37 摄氏度（备制感受态时可于 18–30∘C 低温慢速生长以提高转化效率）。

4 冻存菌种复苏、摇菌扩增与感受态制备工作流 / Preservation and Competent Cell Preparation

A 阶段：甘油菌的无菌划线复苏 / Phase A: Recovery from Cryovial

1. 从 −80∘C 冰箱移出 BioVector® HS996 甘油冻存管，在冰上稍许解冻。

2. 使用无菌接种环挑取少许菌液，划线接种至无抗 LB 固体平板上。

3. 置于 37 摄氏度恒温培养箱 中倒置培养 12–16 小时，待长出单菌落。

B 阶段：感受态细胞制备与转化 / Phase B: Electro/Chemically Competent Prep

1. 挑取单菌落接种至 5 mL 无抗 BioVector® LB Medium 中，37∘C 过夜摇菌。

2. 按 1:100 转接至大瓶 LB 培养基中，培养至 ${\text{OD}}_{600}\approx 0.4\text{–}0.6$（对数早中期）。

3. 冰浴预冷后，采用冰冷无菌 10% 甘油进行洗涤（电感受态）或 CaCl2/MnCl2 悬浮（化学感受态），分装冻存。

C 阶段：甘油冻存菌种保藏 / Phase C: Glycerol Stock Preparation

1. 取处于对数生长期（${\text{OD}}_{600}\approx 0.8$）的菌液。

2. 按 1:1 体积比与 BioVector® 30% 无菌甘油保藏液 混合均匀（终甘油浓度 15%）。

3. 分装至无菌冻存管中，直接置于 −80∘C 超低温冰箱长期保存。

5 噬菌体抗性与高转化效率（$\ge 1\times 10^8\text{cfu/}\mu \text{g}$）一票否决制质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

杂菌与噬菌体污染常规筛查 (Contamination & Phage Resistance Surveillance)

必须定期使用 BioVector® Microbial Purity Kit 排除噬菌体及其他杂菌污染；同时验证其在无抗平板上的纯度以及对 T1 噬菌体的抗性特征（tonA 基因表现）。

转化效率与蓝白斑互补（Efficiency $\ge 1\times 10^8\text{cfu/}\mu \text{g}$）一票否决制质控红线 (Cloning Efficiency Gatekeeper)

为了阻断由于感受态失效、基因突变导致无法 α-互补或转化效率暴跌致使克隆实验彻底失败的灾难性后果，质控部门或研究人员必须在感受态批次建库时，执行硬性的“转化效率与基因型 Identity”一票否决制质控：

1. 纯度与无外源抗性红线：未转化质粒的 HS996 菌株在含 Amp/Kan/Tet 的抗性平板上必须 100% 无法生长（证明无外源质粒/杂菌污染）。

2. 转化效率与 $\alpha$-互补质控红线（核心考核）：使用标准质粒 pUC19（10 pg）进行转化测定，化学感受态效率必须严格 $\ge 1.0\times 10^8\text{cfu/}\mu \text{g}$（电感受态 $\ge 1.0\times 10^9\text{cfu/}\mu \text{g}$），且在 X-Gal/IPTG 平板上蓝白斑互补清晰率达到 $100\%$。

3. 一票否决处理规范：一旦质控检测发现转化效率 跌破 $1\times 10^8\text{cfu/}\mu \text{g}$ 门槛线 或出现自发抗性杂菌，该批次感受态/菌株执行一票否决红线制，全盘作废彻底高压灭菌销毁（121 摄氏度，20 分钟）。绝对禁止将低效率或变异感受态细胞投入分子克隆实验。必须立刻重新复苏原始极低代次的 BioVector® HS996 种子甘油管，重新扩增制备。(Enforce a rigid functional gatekeeper: HS996 competent stocks must strictly verify purity paired with a transformation efficiency $\ge 1.0\times 10^8\text{cfu/}\mu \text{g pUC19}$. Any loss of competence or background contamination triggers an immediate system veto to destroy running lots instantly.)