BioVector® 4T1-hHER2-Luc 小鼠三阴性乳腺癌三功能工程细胞株 / BioVector® Mouse Triple-Negative Breast Cancer 4T1-hHER2-Luc Cell Line

1 细胞株基本信息与生理表型 / Cell Line Identification and Physiological Profiling

• 细胞株名称 (Cell Line Name)：BioVector® 4T1-hHER2-Luc 小鼠三阴性乳腺癌三功能工程细胞株 (BioVector® Mouse Triple-Negative Breast Cancer 4T1-hHER2-Luc Tri-functional Engineered Cell Line)。

• 常用别名与通用代号 (Synonyms & Alternative Line Designations)：

  • 4T1/hHER2/Luc Stable Line

  • 4T1-HER2-Luciferase Murine Breast Cancer Model

  • BioVector® 4T1-hHER2-Luc Syngeneic Reporter Strain

  • 4T1-hHER2-Luc Baseline

• 种属与组织来源 (Species & Tissue Origin)：小鼠（Mus musculus，BALB/c 背景），来源于小鼠自发性乳腺癌细胞系（4T1），通过慢病毒稳定转染同源共表达人源 hHER2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2，人表皮生长因子受体 2）与 Luciferase（萤火虫荧光素酶）基因构建的三功能工程肿瘤细胞株。

• 基因型与表型指纹 (Genotype & Phenotypic Fingerprint)：保持 BALB/c 小鼠 MHC Class I 基因背景，高水平稳定表达人源 HER2 膜表面靶点与细胞质内 Luciferase 蛋白；保留 4T1 亲本系极强的自发性肺部及骨骨转移能力（Spontaneous Metastasis）。

• 形态与生长表型 (Morphology & Growth Profile)：上皮样细胞（Epithelial-like），贴壁生长（Adherent）。呈多角形或梭形铺展，增殖迅速，贴壁紧密，倍增时间约 14-18 小时；在 BALB/c 同基因小鼠体内具有极高的原位（Orchotopic/Mammary Fat Pad）成瘤与多器官自发转移能力。

• 生物安全等级 (Biosafety Level)：1 级安全控制（BSL-1，体外科研、HER2 靶向 ADC 药物评估、CAR-T 细胞疗法及活体成像小鼠转移模型专用）。

2 分子肿瘤学特征与 HER2 靶向药物/CAR-T & 活体成像（BLI）评估模型价值 / Molecular Dynamics and Targeted Therapy Models

BioVector® 4T1-hHER2-Luc 细胞株是开展 HER2 靶向抗体（如 Trastuzumab, Pertuzumab）、HER2-ADC 药物（如 T-DXd / Enhertu）、HER2-CAR-T/CAR-NK 免疫细胞疗法以及 BALB/c 同基因小鼠体内小动物活体光学成像（Bioluminescence Imaging, BLI）评估中公认的“国际标准靶向与成像双监控模型”：

The BioVector® 4T1-hHER2-Luc cell line serves as a highly versatile syngeneic murine model engineered to stable co-express human HER2 and Firefly Luciferase for evaluating HER2-targeted ADCs, CAR-T therapies, and non-invasive bioluminescent metastasis tracking in immunocompetent BALB/c mice:

核心人源 HER2 靶点与荧光素酶生物发光系统 (Human HER2 Expression & Bioluminescent Tracking)

作为跨物种分子靶向与体内无创追踪相结合的工程底盘，该细胞在分子功能层面展现出确凿的重组表达指纹：

• 人源 hHER2 膜表达与药物结合 (Human HER2 Surface Presentation)：细胞膜表面高水平稳定表达人源 HER2 蛋白，可专一性识别并结合特异性抗 HER2 单抗、ADC 药物或 CAR-T 细胞受体，提供逼真的靶向杀伤效应响应体系。

• 高光子输出与定量成像 (High-Luminance Bioluminescence)：表达具有高催化活性的 Firefly Luciferase 酶，配合 D-Luciferin 底物可释放强烈的生物发光信号（Rlu），信号强度与活细胞数量存在严格的线性对应关系，可无创监测体内微小转移灶。(Provides a robust system co-expressing human HER2 for target recognition and Luciferase for high-sensitivity in vivo bioluminescent imaging of primary tumor growth and spontaneous lung/bone metastasis.)

3 细胞完全培养基配方与加压筛选传代栽培规范 / Routine Culture and Maintenance Formulations

核心红线规程 / Antibiotics Selection & High Growth Rate Notice

4T1-hHER2-Luc 细胞增殖速度极快（14-18 小时倍增），且极易在无抗生素筛选压下丢失人源 hHER2 或 Luciferase 表达。日常培养基中必须定期补充 BioVector® Puromycin 筛选抗生素；传代融合度绝对不能超过 85%，否则培养液极速酸化会导致细胞出现大面积自噬与脱落；接种密度需控制在 $2\times 10^4 \text{ cells/cm}^2$ 左右。(Maintain strictly under BioVector® Puromycin pressure using specialized RPMI-1640 media; subculture before reaching 85% confluence to prevent metabolic stress and loss of reporter expression.)

基础与完全培养基组分配方 / Complete Growth Media Formulations

• 1. 高品质完全培养基 (BioVector® Complete RPMI-1640 Medium for 4T1-hHER2-Luc)：

  • BioVector® Advanced RPMI-1640 Base（高糖 RPMI-1640 基础培养基）：89%

  • BioVector® Premium Fetal Bovine Serum（特级胎牛血清，经热灭活）：10%

  • BioVector® Certified Penicillin-Streptomycin（优质双抗补剂）：1%

• 2. 稳定表达筛选抗生素补剂 (BioVector® Selective Antibiotics)：

  • BioVector® Puromycin Selective Grade（嘌呤霉素）：终浓度 1.0-2.5 $\mu\text{g/mL}$（维持 hHER2 及 Luc 表达压）

• 3. 辅助细胞消化与洗涤液 (Cell Harvest Reagents)：

  • BioVector® Standard Trypsin-EDTA Digest Solution（标准胰酶消化液，0.25% Trypsin + 0.02% EDTA）

  • BioVector® Sterile Phosphate Buffered Saline（无菌 PBS 洗涤液）

标准物理培养环境 (Incubation Parameters)

• 气体与温度控制 (Incubation Setup)：标准恒温加湿培养箱，运行工作温度精密锁定在 37 摄氏度，5% 二氧化碳 ($\text{CO}_2$)。

4 细胞冻存管复苏、传代培养与超低温冻存工作流 / Thawing, Passage, and Cryopreservation Workflows

A 阶段：细胞冻存管的快速复苏启动 / Phase A: Thawing & Primary Seeding

1. 从零下 196 摄氏度液氮罐中移出 BioVector® 4T1-hHER2-Luc 细胞冻存管，立刻放入 37 摄氏度水浴 中快速摇晃融化（2 分钟内）。

2. 在无菌超净台内，将融化的细胞悬液转移至含 5 mL 预热 BioVector® Complete RPMI-1640 Medium 的 15 mL 离心管中。

3. 1,000 rpm（约 $200\times g$）离心 5 分钟，吸弃含 DMSO 的冻存上清。

4. 加入 5 mL 不含 Puromycin 的新鲜完全培养基重悬细胞，接种至 T25 培养瓶中过夜；24 小时贴壁后更换为含 Puromycin 的完全培养基。

B 阶段：日常传代与消化操作 / Phase B: Subculturing Protocol

1. 当细胞融合度达到 70%-80% 时进行传代（切勿等待长满）。

2. 吸弃旧培养基，用 BioVector® PBS 洗涤液 清洗细胞层 1-2 次。

3. 加入 1 mL BioVector® Standard Trypsin-EDTA，置于 37 摄氏度孵箱温育 1-2 分钟，显微镜下观察至细胞收缩圆形脱落。

4. 立即加入 3 mL 预热的完全培养基终止消化，轻柔吹打制成单细胞悬液。

5. 按 1:4 至 1:8 的比例 传代至新培养瓶中，补足含 Puromycin 的完全培养基继续培养。

C 阶段：高存活率超低温冻存建立 / Phase C: Cryopreservation

1. 收集处于对数生长盛期（融合度约 80%）的 4T1-hHER2-Luc 细胞。

2. 使用 BioVector® High-Recovery Cell Cryopreservation Medium（高复苏无血清细胞冻存液） 重悬细胞，调整细胞密度至 $2\times 10^6 \text{--}5\times 10^6 \text{ cells/mL}$。

3. 分装至无菌冻存管中，使用程序降温盒置于零下 80 摄氏度冰箱冷冻过夜，随后转入 液氮罐（零下 196 摄氏度） 长期保存。

5 支原体/STR鉴定与 hHER2 膜阳性率（$\ge 90\%$）及荧光素酶活性一票否决制质控红线 / Downstream Quality Control Metrics

支原体与小鼠 STR 基因同源性常规筛查 (Contamination & Lineage Identity Surveillance)

4T1-hHER2-Luc 细胞易因快速扩增或交叉污染导致基因漂移。必须定期使用 BioVector® Mycoplasma PCR Detection Kit 筛查支原体；同时，定期使用 BioVector® Mouse STR Profiling Kit 验证小鼠 STR 位点（必须纯合匹配 BALB/c 背景）。

流式 hHER2 阳性率（$\ge 90\%$）与 Luc 发光活性能量（$1\times 10^4 \text{ RLU/cell}$）一票否决制双质控红线 (Dual-Marker Expression Gatekeeper)

为了阻断由于长期连续体外传代导致抗生素压失效、hHER2 膜蛋白基因沉默丢失、或荧光素酶表达断崖式衰减致使体外 ADC 杀伤及体内活体成像实验彻底失效的灾难性后果，质控部门或研究人员必须在细胞建库与动物接种前，执行硬性的“膜靶点-发光活性”双重一票否决制质控：

1. FACS 人源 hHER2 表达阳性率质控红线：使用抗人 HER2 荧光单克隆抗体进行流式细胞术（FACS）检测，hHER2 阳性细胞比例（$\text{hHER2}^+$ Ratio）必须严格大于或等于 $90.0\%$。

2. Luciferase 生物发光活性质控红线（核心考核）：取处于对数生长期的细胞，加入 D-Luciferin（150 $\mu\text{g/mL}$）底物使用酶标仪检测发光值，平均单细胞发光信号必须严格达到 $1\times 10^4 \text{ RLU/cell}$ 以上。

3. 一票否决处理规范：一旦质控检测发现流式 hHER2 阳性率 跌破 90% 门槛线，或 单细胞发光活性小于 $1\times 10^4 \text{ RLU}$（或检测出支原体阳性），该生产或实验批次细胞执行一票否决红线制，全盘作废彻底高压灭菌销毁（121 摄氏度，20 分钟）。绝对禁止将靶点丢失或发光失能的细胞投入下游药效评估或动物活体成像。必须立刻重新复苏原始极低代次的 BioVector® 4T1-hHER2-Luc 种子细胞管，在 Puromycin 加压下重新开启扩增与质控循环。(Enforce a rigid, non-negotiable functional gatekeeper: 4T1-hHER2-Luc cell stocks must strictly verify a $\ge 90.0\%$ human HER2 surface positive rate via flow cytometry paired with a high luminescence output ($\ge 1\times 10^4 \text{ RLU/cell}$). Any marker silencing or reduction in bioluminescent signal triggers an immediate system veto to destroy running cultures instantly.)