BioVector® Myc2+AD 酵母双杂交激活域融合质粒 / BioVector® Myc2+AD Yeast Two-Hybrid Activation Domain Fusion Plasmid

通用定义 / General Definition:BioVector® Myc2+AD 是一种专门用于酵母双杂交 (Y2H) 实验的重组质粒。它将植物中关键的转录因子 Myc2 与转录激活域（Activation Domain, 简称 AD，通常源自 GAL4 或 VP16）融合在一起。Myc2 是茉莉酸 (Jasmonate, JA) 信号通路中的核心调控蛋白，控制着植物的防御反应、生长发育和次生代谢。该质粒通常被用作“猎物 (Prey)”载体，用来检测 Myc2 与其他候选蛋白（如 JAZ 抑制蛋白）之间的相互作用。

BioVector® Myc2+AD is a recombinant plasmid specifically designed for Yeast Two-Hybrid (Y2H) assays. It features the plant master transcriptional regulator Myc2 fused to a transcriptional Activation Domain (AD, typically from GAL4 or VP16). Myc2 is a central hub in the Jasmonate (JA) signaling pathway, governing plant defense, growth, and secondary metabolism. This plasmid is commonly used as a "Prey" vector to investigate protein-protein interactions between Myc2 and potential partners, such as JAZ repressor proteins.

BioVector® Myc2+AD 技术参数 (Technical Specifications)

1. 质粒结构特征

• 融合形式： AD-Myc2 (激活域位于 Myc2 的 N 端或 C 端)。

• 骨架载体： 常基于 pGADT7 或 pAD-GAL4。

• 启动子： ADH1 启动子（在酵母中组成型表达）。

• 筛选标记：

  • 酵母： LEU2 (使其能在缺乏亮氨酸的培养基上生长)。

  • 大肠杆菌： Ampicillin (氨苄青霉素)。

• 来源物种： 通常为拟南芥 (Arabidopsis thaliana) 或番茄 (Solanum lycopersicum) 的 Myc2 序列。

2. 核心功能

• 蛋白互作检测： 当 Myc2+AD 与含有目标蛋白的 DNA 结合域 (BD) 质粒共同转化到酵母菌株（如 AH109 或 Y2HGold）中时，如果两者发生物理结合，AD 就会靠近启动子，驱动报告基因（如 HIS3, ADE2, LacZ）的表达。

主要科研应用 (Research Applications)

1. 茉莉酸信号通路研究

• JAZ-Myc2 相互作用： 验证 JAZ 蛋白是否在没有信号刺激时结合并抑制 Myc2 的活性。

• 辅激活因子鉴定： 寻找与 Myc2 结合并协同调控下游基因转录的新蛋白。

2. 转录调控网络映射

• 复合体组装： 研究 Myc2 如何与其他转录因子（如 MYB, bHLH 家族成员）形成异源二聚体。

实验操作指南 (Experimental Guidelines)

1. 转化与筛选

• 酵母转化： 使用醋酸锂法将 Myc2+AD 与相应的 BD 质粒共转化。

• 双缺培养基 (SD/-Leu/-Trp)： 验证转化是否成功。

• 多缺培养基 (SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)： 验证蛋白之间是否存在相互作用。

2. 对照设置

• 阴性对照： AD-Myc2 + 空白 BD 载体（排除 Myc2 的自激活作用）。

• 阳性对照： 使用已知互作的对，如 pGADT7-T + pGBKT7-53。

技术指标 (Technical Data Summary)

注意 / Note: 由于 Myc2 自身具有转录激活结构域，将其克隆在 BD 载体上时常会产生严重的自激活现象。因此，在酵母双杂交实验中，将 Myc2 构建在 AD 载体（即 Myc2+AD）上是更为常规且可靠的选择。Since Myc2 possesses its own intrinsic transcriptional activation domain, placing it in a BD vector often results in high auto-activation. Consequently, constructing Myc2 in an AD vector (Myc2+AD) is the standard and more reliable approach for Yeast Two-Hybrid experiments.

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