BioVector® pCAMBIA1300-35S-mCherry-PTS1 植物表达质粒 / BioVector® pCAMBIA1300-35S-mCherry-PTS1 Plant Expression Plasmid

通用定义 / General Definition:BioVector® pCAMBIA1300-35S-mCherry-PTS1 是一种专为植物细胞设计的过氧化物酶体定位于报告质粒。该载体基于经典的 pCAMBIA1300 骨架，利用强力的 CaMV 35S 启动子 驱动红色荧光蛋白 mCherry 的表达。其核心特征是在 mCherry 的 C 端融合了 PTS1 (Peroxisomal Targeting Signal 1) 序列（通常为三肽 SKL）。PTS1 信号肽能被胞质中的受体识别并引导融合蛋白精准定位于过氧化物酶体。该质粒是研究植物过氧化物酶体动力学、细胞器相互作用以及作为植物转染实验中亚细胞定位对照的核心工具。

BioVector® pCAMBIA1300-35S-mCherry-PTS1 is a peroxisomal-targeted reporter vector designed for plant systems. Built upon the pCAMBIA1300 backbone, it utilizes the robust CaMV 35S promoter to drive the expression of the red fluorescent protein mCherry. The defining feature of this construct is the C-terminal fusion of the PTS1 (Peroxisomal Targeting Signal 1) sequence (typically the tripeptide SKL). The PTS1 signal is recognized by cytosolic receptors, ensuring the precise translocation of mCherry into the peroxisomal matrix. This plasmid is a vital tool for studying plant peroxisome dynamics, organelle interactions, and serving as a sub-cellular marker in plant transformation assays.

BioVector® pCAMBIA1300-35S-mCherry-PTS1 技术说明书 (Technical Datasheet)

中文版说明书 (Chinese Datasheet)

1. 质粒基本信息

• 载体骨架： pCAMBIA1300（二元载体，适用于农杆菌介导的转化）。

• 启动子： CaMV 35S（双启动子或单启动子，确保在双子叶植物中高效表达）。

• 报告基因： mCherry（红色荧光蛋白，激发波长约 587 nm，发射波长约 610 nm）。

• 定位信号： PTS1 (C-terminal SKL sequence) – 过氧化物酶体基质定位。

• 植物筛选抗性： 潮霉素 (Hygromycin B, 50 mg/L)。

• 细菌筛选抗性： 卡那霉素 (Kanamycin, 50 mg/L)。

2. 核心生物学功能

• 亚细胞标记： 在植物细胞（如烟草叶片、拟南芥原生质体）中产生鲜艳的红色点状荧光，代表过氧化物酶体。

• 细胞器动力学： 用于实时观察过氧化物酶体在细胞骨架上的移动及分裂过程。

• 共定位分析： 与绿色荧光 (GFP/YFP) 标记的目标蛋白共转，验证目标蛋白是否定位于过氧化物酶体。

3. 实验应用方案

• 烟草瞬时表达： 通过农杆菌渗入法 (Agro-infiltration) 在本氏烟草叶片中快速表达。

• 拟南芥转化： 配合花序浸染法 (Floral Dip) 建立稳定转基因植株。

• 原生质体转染： 利用 PEG 介导法在拟南芥或水稻原生质体中进行亚细胞定位研究。

4. 注意事项

• 荧光猝灭： 虽然 mCherry 较稳定，但在强激光下长时间连续扫描仍可能导致猝灭。

• 农杆菌选择： 建议使用 EHA105、GV3101 或 LBA4404 等常用农杆菌菌株进行转化。

English Datasheet

1. Basic Plasmid Information

• Backbone: pCAMBIA1300 (Binary vector for Agrobacterium-mediated transformation).

• Promoter: CaMV 35S (Ensures constitutive high-level expression in most plant tissues).

• Reporter: mCherry (Red Fluorescent Protein; Ex ~587 nm, Em ~610 nm).

• Targeting Signal: PTS1 (C-terminal SKL sequence) – Directs protein to the peroxisomal matrix.

• Plant Selection: Hygromycin B (50 mg/L).

• Bacterial Selection: Kanamycin (50 mg/L).

2. Key Biological Functions

• Subcellular Marker: Produces distinct punctate red fluorescent signals within plant cells, identifying individual peroxisomes.

• Organelle Interaction: Used to monitor peroxisome distribution and their spatial relationship with other organelles like chloroplasts or mitochondria.

• Co-localization Assays: Acts as a reference channel for validating the peroxisomal localization of GFP-tagged candidate proteins.

3. Experimental Applications

• Transient Expression: Highly effective for tobacco leaf agro-infiltration (Nicotiana benthamiana).

• Stable Transformation: Suitable for creating transgenic lines (e.g., Arabidopsis) via the floral dip method.

• Protoplast Assays: Ideal for PEG-mediated transfection in Arabidopsis or rice protoplasts for rapid subcellular imaging.

4. Key Usage Notes

• Signal Specificity: The PTS1 pathway is highly conserved; however, protein folding speed can occasionally affect import efficiency. Ensure cells are imaged within the optimal window (typically 36-72 hours post-infiltration).

• Backbone Versatility: The pCAMBIA1300 series is low-copy in E. coli; use high-quality kits and larger culture volumes for plasmid extraction.

注意 / Note: 质粒应储存在 -20 摄氏度。在进行多色荧光成像时，请确保设置正确的滤光片以消除 mCherry 与叶绿体自发荧光（深红色）之间的干扰。Store at -20°C. When performing multi-color imaging, ensure precise spectral unmixing or appropriate filter settings to distinguish mCherry signals from the far-red autofluorescence of chlorophyll.

BioVector NTCC质粒载体菌株细胞蛋白抗体基因保藏中心

电话:400-800-2947

工作QQ/微信同号:1843439339

网址

http://www.biovector.net