CHO-S仓鼠卵巢细胞-GFP绿色荧光稳定表达细胞株-NTCC保藏中心

CHO-S仓鼠卵巢细胞-GFP绿色荧光稳定表达细胞株-NTCC保藏中心

CHO-S Cells

Cat No.: NTCC502649

The CHO-S cellline is a stable aneuploid cell line established from the ovary of

an adultChinese hamster (Puck et al., 1958). The CHO-S cells are:

• prepared from low passage Master Cell Bankcultures derived from parental

CHO-S cellsthat were re-cloned by limiting dilution in CD CHO Medium,

and selectedfor their superior serum-free cell growth and transfection

efficiencies(Ciccarone et al., 1999; Schifferli, 1999).

• adapted to serum-free suspension growth.

• manufactured under cGMP guidelines and banked inCD CHO, a serum-free,

protein-free,and chemically defined medium that is formulated with no

components ofanimal or human origin (Gorfien, 1998).

ParentalCell Line

Chinese HamsterOvary (CHO) cells are among the most commonly used cell

lines fortransfection, expression and large-scale production of recombinant

proteins. TheCHO cell line is a stable aneuploid cell line established from the

ovary of anadult Chinese hamster (D'Anna, 1996; D'Anna et al., 1997; Deaven &

Petersen, 1973;Puck et al., 1958).

Typically,CHO-S Cells cultured in CD FortiCHO Medium

have a doublingtime in the range of 17–20 hours; however, doubling time can

exceed 20 hoursduring the first few passages after the cells have been thawed.

Do not allowCHO-S Cells to reach a cell density above 2 × 106

cells/mL beforetransfection, because this may cause a decrease in transfection

efficiency.

CHO-S Cells. 仓鼠卵巢细胞    【种属】：  仓鼠    【组织】：   卵巢

CHO-S 细胞复苏

1.37°C 水浴预热培养基（CHO 细胞无血清培养基）；

2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C 水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；

3.在超净台中加入5ml 培养基重悬细胞，1000rpm 离心5min；

4.弃上清，加入5ml 培养基重悬细胞，用血小球计数板进行细胞计数，按细胞密度1×106/ml 接种到125ml

无菌摇瓶中（带空气过滤通气孔的摇瓶）,同时加胎牛血清至终浓度为2%；此后细胞每传代一次，血清浓

度降低一半，即2%，1%，0.5%，0.25%，0.125%，0.此时细胞可无血清培养。

5.摇瓶置于37°C，8% CO2 培养箱中的摇瓶架上，125rpm 培养。

CHO-S 细胞传代

1.取细胞计数(详见CHO-S 细胞冻存)，当细胞密度达到1.0-3.0×106/ml 时（最好不要超过3.0×106cells/ml），

可传代；

2.37°C 水浴预热培养基（CHO 细胞无血清培养基）；

3.在超净台中，加适量预热好的培养基到无菌摇瓶中，以细胞终密度为6-7×105/ml 接种细胞（也可1000rpm，

5min 离心后弃上清，用预热好的培养基重悬并调整细胞密度为6-7×105/ml），转移到无菌摇瓶中；

4. 摇瓶置于37°C，8% CO2 的培养箱中的摇瓶架上，125rpm 培养。

注：CHO-S 细胞对氧的要求较高，因此，悬浮培养必须具有高表面积体积比，否则细胞的生长会受到抑制。

培养基的体积不能超过摇瓶的五分之二；即100 毫升的摇瓶不能超过40ml 培养基，250ml 摇瓶不能超过

100ml 培养基。

CHO-S 细胞冻存

1.细胞计数：

1)洗净晾干血小板计数板和盖玻片，将盖玻片完全覆盖计数区

2)充分混匀细胞，取少量(0.1-0.5ml)细胞悬液与等体积的染色液台盼蓝混合，移液器吹吸混合均匀，用移液

器取20ul 混合液从盖玻片两端(与中间凹槽平行的两端)分别打入细胞，以细胞悬液刚好浸湿盖玻片为佳

3)显微镜下，数四个计数区的总细胞数，无活性细胞染成蓝色，活细胞不被染色

4)细胞密度=细胞总数/4×10000×2

这里10000 是不变的，因为计数的细胞是在体积为1mm×1mm×0.1mm 即10-4cm3 计数池内，25px3=1ml，将

四个计数区的细胞数除以4 取平均数，乘2 是补偿加等体积台盼蓝形成的稀释。

5)细胞活性=活细胞数/细胞总数×100%

注:细胞密度高时，可调整细胞悬液和台盼蓝的比例，计数时乘以相应的稀释倍数即可。

2.当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以冻存细胞。

3.37°C 水浴预热培养基（CHO 细胞无血清培养基）。

4.在超净台中将要冻存的细胞移入离心管，1000rpm 离心5min。

5.弃上清，用90%培养液+10%DMSO 的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为5-10×106/ml。

6.将细胞悬液分装到冻存管中(1-1.5ml/管)。

7.将装有细胞的冻存管放入程序降温冻存盒，-20°C 放1-2h 后，-80°C 过夜，然后快速转移到液氮中。

CHO-S 细胞贴壁培养

1.37°C 水浴预热培养基（CHO 细胞无血清培养基+10%FBS）；

2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C 水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）；

3.在超净台中加入5ml 培养基重悬细胞，1000rpm 离心5min；

4.弃上清，加入5ml 培养基重悬细胞后转入T25 培养瓶中，轻轻晃匀；

5.置于37°C，5% CO2 培养箱中培养；

6.4-6 小时后，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养；

7.每天观察细胞的状态和长势；

8.当细胞融合度达到90%以上时，给细胞传代；

9.在超净台中，弃培养基，加入2-5mlPBS 清洗细胞后，再加入1ml 胰酶消化细胞；

10.显微镜下观察到细胞变圆，有细胞开始脱离瓶壁时，加入5ml 培养基（CHO 细胞无血清培养基+10%FBS）

终止消化；

11.用移液器轻轻吹下瓶壁上剩余的细胞，并轻轻吹打将细胞吹散；

12.将细胞移入离心管中，1000rpm 离心5min；

13.弃上清，加入15-20ml 的培养基（含血清）重悬细胞后转入T75 培养瓶中或按适当比例传到T25 瓶中（确

保细胞贴壁后融合度在25-50%之间），细胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25 瓶），混匀细胞悬液，

确保细胞均匀分布；

14.将培养瓶置于37°C，5% CO2 的无菌培养箱中培养。