推荐E.coli大肠杆菌原核可溶性表达载体及菌株的选择-BioVector NTCC典型培养物保藏中心

BioVector NTCC典型培养物保藏中心提供大肠杆菌原核可溶性表达载体及菌株

http://www.biovector.net/contents/content/add/catid/96.html

E.coli大肠杆菌原核可溶性表达比较好的载体请选用如下载体，配套菌株：

pLLP-ompA, pIN-III-ompA，pLLP—STII，pMBP—P，(分泌型表达系列),

pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,易可溶表达

pTrc—CKS 原核可溶性表达载体,CKS融合表达；

pET—DsbA 原核可溶性表达载体，DsbA融合表达；

pMBP—C 胞内可溶性表达；

pET—Trx 硫氧还蛋白融合表达促进蛋白正确折叠

pTrxFus, 配套GI724菌株或GI698菌株

配套可溶表达比较好的菌株(trxB/gor突变型，促进二硫键形成和蛋白折叠)：

BL21TrxB(DE3)

BL21TrxB(DE3)plysS

Origami(DE3)
Origami(DE3)pLysS

Origami 2(DE3)
Origami 2(DE3)pLysS

Origami B(DE3)
Origami B(DE3)pLysS

Rosetta-gami(DE3)
Rosetta-gami(DE3)pLysS

Rosetta-gami 2(DE3)
Rosetta-gami 2(DE3)pLysS

Rosetta-gami B(DE3)
Rosetta-gami B(DE3)pLysS

pLLP—OmpA表达载体采用E.coli强启动lpp和OmpA分泌信号肽，同时在C端添加了6个His可采用chelating sepharose亲和层析纯化目标蛋白。该表达载体成功地实现过人生长激素的基因工程工业化。经多年临床验证，分泌型重组人生长激素临床副反应大大低于包涵体型的重组人生长激素。

pLLP—STII表达载体采用E.coli强启动lpp和STII分泌信号肽，同时在C端添加了6个His便于采用chelating sepharose亲和层析纯化目标蛋白。STII信号肽引导能力强且易于被E.coli信号肽酶切割。即使第一个氨基酸是半胱胺酸的干扰素也可以实现分泌表达。

pMBP—P表达载体采用E.colitac启动子和分泌型麦芽糖结合蛋白（maltose binding protein）同时选用凝血酶切割位点并在C端添加6个His便于采用chelating sepharose亲和层析纯化目标蛋白。该表达系统在Medline里有大量的背景文献参考。它通过MBP引导分泌，可以实现许多基因在周质空间里正确折叠，如TPO（1-153aa）、GM—CSF、IL—2等。我们采用这一表达系统配合固相化的凝血酶成功地获得了正确折叠的rhGM—CSF，临床试用表明其副反应比包涵体型rhGM—CSF大大降低。该表达载体表达的蛋白还可通过Amylose亲和层析。

pMBP—C表达载体采用E.coli tac启动子和胞内可溶性麦芽糖结合蛋白（maltose binding protein），同时选用凝血酶切割位点并在C端添加6个His便于采用chelating sepharose亲和层析纯化目标蛋白。该表达系统在Medline里有大量背景文献参考。它通过MBP胞内融合表达，表达产物可占菌体的20%—30%，可形成可溶性蛋白，也可形成包涵体。融合蛋白还可以通过Amylose亲和层析纯化。

pET—GST表达载体采用T7启动子和GST融合表达，同时选用人鼻病毒14亚型3C蛋白酶专一性切割位点。本公司有高纯度的重组人鼻病毒14亚型3C蛋白酶出售，同时还有专一性吸附该蛋白酶的树脂出售。此外，C端还添加了6个His，便于采用chelating sepharose亲和层析。本载体表达的融合蛋白可采用吸附GST的亲和层析和6个His的chelating sepharose双重亲和层析，极大地方便了下游纯化。GST融合表达背景文献在medline里极为丰富，有数百个基因采用GST融合表达成功。

pET—Trx表达载体采用蛋白质工程改造的硫氧还蛋白即将其中两个氨基酸突变成His，使硫氧还蛋白在空间立体结构上形成三个组氨酸位点（His-patch），便于采用chelating sepharose亲和层析。该表达载体采用T7启动子和（His-patch）Thioredoxin融合表达，同时选用人鼻病毒14亚型3C蛋白酶专一性切割位点。硫氧还蛋白作为分子内伴侣可以帮助许多基因在E.coli胞内正确折叠如IL—3、IL—6、IL—11等。

pET—His表达载体采用N端6个His和T7启动子。高效表达产物的N端具备6个His，便于采用chelating sepharose 亲和层析纯化目标蛋白。同时该载体选用了凝血酶专一性切割切点。融合蛋白既可以采用高纯度限制级的冻干凝血酶液体切割，也可以采用固相化凝血酶切割。

pTrc—CKS表达载体采用E.coliTrc启动子和蛋白质工程改造过CKS(CTP:CMP-3-deoxy-D-manno-octulosonate cytidylyltransferase or CMP-KDOsynthetase)基因融合表达，同时选用人鼻病毒14亚型3C蛋白酶专一性切割位点。CKS融合表达是美国Abbot公司的专利，CKS融合蛋白研制成功HIV和HCV重组抗原并取得FDA认证在美国上市。CKS是一个非常稳定且高度可溶的理想融合伴侣。本发明除去掉CKS C端8个氨基酸外，还将C端Met突变成Thr，一方面可报自已的专利，另一方面有利于基因表达。

pET—DsbA表达载体采用T7启动子和DsbA基因融合表达，同时选用凝血酶切割位点。DsbA是近年来发现帮助二硫键形成的重要分子内伴侣之一。本试剂盒DsbA基因去掉了信号肽，同时将DsbA氧化还原功能相关的两个半胱氨酸（cys）突变成丝氨酸（ser），这样与突变后的DsbA融合可实现许多基因的胞内可溶性有活性的高表达（表达量大于30%），如IGF—1、IGFBP、EGF、Insulin等。

http://www.biovector.net/contents/content/add/catid/96.html