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SNAP tag标签表达质粒载体

SNAP-tag is a 182 residues polypeptide (19.4 kDa) that can be fused to any protein of interest and further specifically and covalently tagged with a suitable ligand, such as a fluorescent dye.
SNAP-tagTM简介
O6-鸟嘌呤烷基-DNA烷基转移酶（O6-alkylguanine-DNA alky¬ltransferase, AGT）是一种核蛋白，它通过把烷基化DNA链上鸟嘌呤O6-位的烷基转移至自身活性中心的半胱氨酸上，来行使DNA修复功能。
洛桑理工学院（Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne）Kai Johnsson博士科研小组发现，AGT可以特异性并快速地与苯甲基鸟嘌呤（benzylguanine, BG）衍生物发生反应，以共价键结合。
随后，研究人员通过对AGT进行突变改造，获得了一种不与DNA链上的鸟嘌呤进行反应的蛋白，该蛋白不再定位于细胞核中，但与小分子BG衍生物的亲和力却大大地提高，而且只有22KDa大小。
现在，研究人员赋予了它一个广为人知的名字——SNAP-tag。
SNAP-tag的优点
SNAP-tag无论在体内还是体外都可以特异性并快速与BG衍生物发生特异性反应，以共价键结合。
由于BG可带各种不同的其它化学基团，如生物素、荧光素（Fluorescein）、罗丹明（Rhodamine）等，从而实现一种标签蛋白可以被多种配体标记，是一种革命性的自我标记蛋白标签。
SNAP-tag大小为22kDa，在很多常见表达系统中都能够良好表达。
目前为止，已有相当数量和种类的蛋白质作为N末端和C末端SNAP-tag融合蛋白被成功表达出来。
SNAP-tagTM在蛋白质标记中具有三大优势，可以广泛应用于蛋白标签的各个应用领域，是一种非常理想的蛋白标签。
SNAP-tagTM的三大优势
优势 详细内容
一个标签，多种标记 免去构建融合蛋白的繁琐操作流程
实验环境多样化 可以在活细胞或除去细胞的混合物中进行蛋白标记，然后在SDS-PAGE胶上直接检测
实验进展可实时监测 可以依据自身实验要求添加探针，进行脉冲追踪成像检测
优点 详细内容
高稳
定性

SNAP-tagTM对侧面基团替代的苯甲基鸟嘌呤进习性切割，将替代性的苯甲基集团转移至活性位点并释放出自由鸟嘌呤，如此获得的硫醚键具有高稳定性；
高特
异性

因为苯甲基鸟嘌呤在生化环境中十分稳定，而且没有其他蛋白质会与此类物质发生反应，因此这种自我标记具有很高的特异性；
标记
的

多样性

SNAP-tagTM对于可以连接的化合物的性质，没有严格的限制，即SNAP-tagTM与苯甲基鸟嘌呤衍生物之间的结合反应不应受苯甲基鸟嘌呤是具有哪种“二级标签”的影响，因此，SNAP-tagTM可以有多种配体，从而轻松实现标记的多样性。
SNAP-tagTM功能
SNAP-tagTM功能多样，可以应用于各种不同的研究，主要包括：
可在活细胞或细胞提取物中快速标记融合蛋白；
可将蛋白质共价固定于固相介质表面，而无需进行之前的纯化工作；
可与蛋白酶配合，在把融合蛋白固定化后，纯化目的蛋白，捕获蛋白复合物；
可直接在SDS-PAGE胶中检测SNAP-tagTM融合蛋白。




SNAP-tagTM技术原理
通过SNAP-tagTM与底物——苯甲基鸟嘌呤的特异性作用实现标记过程。

SNAP-tagTM所带的活性巯基位点接受了苯甲基鸟嘌呤所携带的侧链苯甲基基团，释放出了鸟嘌呤。
这种新型硫醚键共价结合使SNAP-tagTM所携带的目标蛋白间接携带上了苯甲基基团所带的标记物

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