TransIT-293转染试剂 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

TransIT-293转染试剂

HIV-1 tat非依赖性第三代慢病毒载体
·临床使用可能 ，将HIV-1来源序列排除到极限 ，提高安全性
·优化了包装系统，制备高滴度慢病毒粒子
·和3’LTR/ΔU3 pLVpro vector组合使用可进行P2实验（注：取决于插入基因）

LVpro Packaging Mix是经过优化的质粒混合物，高效表达慢病毒制备所需要的成分，用于包装生产高滴度重组慢病毒。将pLVpro慢病毒载体和LVpro包装质粒混合物共转染Lenti-X 293T细胞，包装质粒瞬时表达Gag、Pol、Rev和VSV-G包膜蛋白，这有助于将重组病毒RNA（从pLVpro慢病毒载体转录而来）包入完整的病毒粒子中（图1）。使用这种经过优化的包装质粒混合物和高效转染Lenti-X 293T细胞的转染试剂Trans IT-Virus-GEN（Mirus Bio, Code No. MIR6700）或Trans IT-293（Mirus Bio, Code No. MIR2700），可以获得高滴度的重组慢病毒，而且在多数情况下，该病毒可用于直接感染靶细胞，而不需要事先进行浓缩处理。

pLVpro vector是tat非依赖性第三代慢病毒载体，其中5’LTR的U3区域被CMV启动子取代，并且在不影响感染滴度的情况下删除了包装信号附近的HIV来源序列。


图1. 使用LVpro Packaging Mix和Lenti-X 293T cells制备慢病毒。
使用LVpro Packaging Mix和携带目标基因的pLVpro慢病毒载体共转染Lenti-X 293T cells（Step1），产生相应的重组慢病毒基因组RNA转录本和病毒包装蛋白（Step2）。重组病毒RNA基因组上的包装信号（ψ）被包装蛋白所识别（Step3），使重组病毒RNA和包装蛋白相结合，形成病毒核心并被转运到细胞膜（Step4）。在那里，病毒核心被包含VSV-G包膜蛋白的细胞膜包裹。这样成熟的具有感染性的病毒粒子从细胞中产生了（Step5），这些病毒粒子会被释放到培养液中，然后从培养液中回收病毒粒子（Step6）。

虽然用这种试剂盒产生的病毒粒子是具有感染性的，但它们缺少在靶细胞中复制和增殖所必需的七种基因。该试剂盒使用了多种不同的质粒用于表达病毒蛋白，因此除非多次发生低频重组，否则很难产生具有复制能力的病毒，这样试剂盒的使用是非常安全的。

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