pR6K-Tps-cm-inv-hly plasmid vector质粒载体 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

pR6K-Tps-cm-inv-hly plasmid vector质粒载体

以质粒 pR6K-TpsGenta-tetR-T7RP 为模板, 利用引物 IR-loxm-genta-F
和 IR-loxm-genta-R, PCR 扩增 loxm-genta-loxm, SalⅠ/
XbaⅠ双酶切后胶回收, 同时将质粒 pET28a 用 SalⅠ/
XbaⅠ双酶切后胶回收大片段, 将此片段与胶回收的
PCR 产物过夜连接, 构建质粒 pET28a-loxm-genta.
在 Red/ET 重组酶的作用下, 将质粒 pET28a-loxmgenta 上的 genta 抗性基因替换成 cm 抗性基因, 获得
重组质粒 pET28a-loxm-cm; (ⅱ) SalⅠ/XbaⅠ双酶切
质粒 pET28a-loxm-cm 和 pBlue-inv-hly, 分别获得
IR-loxm-cm 和 inv-hly 片段, T4 DNA ligase 连接, 电
转化 E. coli GBpir116, 获得转座质粒 pR6K-Tps-cminv-hly

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