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枯草芽孢杆菌D-丙氨酸缺陷型食品级宿主菌株FG01 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

  • 价  格:¥39865
  • 货  号:枯草芽孢杆菌D-丙氨酸缺陷型食品级宿主菌株FG01
  • 产  地:北京
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枯草芽孢杆菌D-丙氨酸缺陷型食品级宿主菌株FG01

以基因dal作为选择标记,以新型Theta型复制子作为食品级表达载体的骨架,以启动子P43作为外源基因表达用启动子,构建了食品级表达质粒pXFGT03和pXFGT05,其中pXFGT05是pXFGT03删除了复制子中两个开放阅读框ORF-3和ORF-4后的衍生物,研究结果表明删除该两个开放阅读框对于质粒的复制功能没有明显影响。 将BgaB的编码基因bgaB分别克隆到质粒pXFGT03和pXFGT05中得到质粒pXFGT03-bgaB和pXFGT05-bgaB,此二质粒转化到宿主菌株FG01中得到食品级重组表达菌株FG01 (pXFGT03-bgaB)和FG01 (pXFGT05-bgaB)。对此二菌株的摇瓶发酵和酶活测定表明,它们表达的BgaB酶活量大致相当,在13 h时,酶活分别达到1.90 U/(mg protein)和2.01 U/(mg protein),是整合表达系统表达的BgaB酶活最大值的10倍以上。对此二质粒的结构和分离稳定性的研究表明,在没有选择压力的情况下传100代后,其稳定性均为100%。 将基因bgaB与枯草芽孢杆菌中性蛋白酶NprB的信号肽编码序列拼接并构建了分泌表达质粒pMKSigbgaB01,该质粒转化到168株后进行了BgaB的表达研究,结果表明该信号肽不能够有效引导BgaB的分泌。将基因bgaB与磷酸二酯酶PhoD的信号肽编码序列拼接并构建了分泌表达质粒pMKSigbgaB03,该质粒转入168株后可以在低磷酸盐培养基中利用Tat分泌途径分泌BgaB。将该信号肽和目标基因的融合片段克隆到启动子PHpaII控制之下得到分泌表达质粒pMASigbgaB05。该质粒转化入168株后,可在丰富培养基中分泌表达BgaB,在重组菌株发酵培养的8-18 h中,上清液中的BgaB酶活占总酶活的比例最高接近40%,平均值为27.5%。 将大肠杆菌Sec分泌途径分子马达蛋白质SecA的编码基因secA和细胞内分子伴侣SecB的编码基因secB整合到枯草芽孢杆菌染色体后,在0.5%木糖存在条件下诱导SecA和SecB的表达,结果表明这两个Sec途径蛋白质的引入和表达不能够有效促进报告蛋白质青霉素G酰化酶在枯草芽孢杆菌中的分泌。

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