生孢梭菌Clostridium sporogenes. 肉毒梭菌检测阳性对照菌 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心

生孢梭菌Clostridium sporogenes. 肉毒梭菌检测阳性对照菌 BioVector NTCC质粒载体菌种细胞基因保藏中心 肉毒梭菌检测阳性对照菌 肉毒梭菌(Clostridium botulinum)，又称肉毒杆菌，是一种严格厌氧型梭状芽孢杆菌。肉毒梭菌是我国肉类罐头产品重点控制的有害微生物，因此在罐头食品的商业无菌检验中要求检测肉毒梭菌及肉毒毒素。 目前，我国现行的肉毒梭菌及其毒素的检测标准有3个，分别为《GB/T 4789.12-2003 肉毒梭菌及肉毒毒素检验》、《SN/T 0865-2000 进出口食品中肉毒梭菌及其肉毒毒素检验方法》和《SN/T 2525-2010 食品中肉毒梭菌的PCR检测方法》。这三个标准方法中均涉及肉毒梭菌的增菌和分离培养过程。众所周知，我国相关标准和法规要求检测实验室应“通过标准培养物来验收培养基(包括试剂盒)、验证方法和评估实验操作”，因此，肉毒梭菌标准菌株的使用对于该菌株的正确检出具有重要作用。 肉毒梭菌能分泌具有神经麻痹毒性的肉毒毒素,因此肉毒梭菌属国家严格管控菌种。在1985年卫生部颁布的《中国医学微生物菌种保藏管理办法》中将其列为二类，即”实验室感染机会较多、感染后的症状较重及危及生命，发病后不易治疗及对人群危害较大的传染病菌种”。2006年卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中，虽然将肉毒梭菌改为三类，但对菌株的管理要求却未放松，仍按二类管理。二类微生物属高致病性病原微生物，使用单位需具备相应防护条件，同时还要获得省级以上卫生行政部门审批。因此对于普通检测单位，不能获得标准阳性对照菌株，成为目前影响检测机构和相关食品企业自检的严重制约。 为解决这个问题，NTCC通过研究发现，生孢梭菌(Clostridium sporogenes)无论从形态学、生理生化方面，还是系统发育学角度，都与肉素梭菌亲缘关系最近。其培养特性与肉毒梭菌非常相似，但生孢梭菌属四类安全菌种，一般微生物学实验室皆可操作，无需特殊审批，可作为肉毒梭菌检测试验中培养基验证、方法学验证和样品增菌阶段的阳性对照菌株。 肉毒梭菌可产生A、B、C、D、E、F、G共8个型的肉毒毒素，其中A、B、E、F型能引起人类疾病。中心构建了含有A、B、E、F等4类肉毒毒素基因的工程菌株，以满足检测单位采用分子生物学技术进行检测的需求。 附表1 生孢梭菌标准菌株特性 菌种编号 NTCC 10385 菌种名称 生孢梭菌Clostridium sporogenes 形态学 G+，杆状，多单在，偶见成双或短链，两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于中央，常见很多游离芽孢。 在卵黄琼脂平板上菌落颜色呈白色，扁平，边缘为不规则，菌落呈珍珠层样，周围窄虹彩样薄层。 关键特性 35℃厌氧培养48h，生长良好。 35℃好氧培养48h，不生长。 附表2 肉毒毒素基因工程菌列表 NTCC编号 宿主 原始编号 基因类型 10780G 大肠埃希氏菌DH5α BontE 含肉毒梭菌typeE基因 10783G 大肠埃希氏菌DH5α BontA 含肉毒梭菌typeA基因 10784G 大肠埃希氏菌DH5α BontB 含肉毒梭菌typeB基因 10785G 大肠埃希氏菌DH5α BontF 含肉毒梭菌typeF基因
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