| 出品公司: | MoBiTec GmbH, Germany |
|---|---|
| 载体名称: | pHT43 |
| 质粒类型: | 枯草芽孢杆菌表达载体 |
| 高拷贝/低拷贝: | 高拷贝 |
| 启动子: | Pgrac |
| 克隆方法: | 多克隆位点，限制性内切酶 |
| 载体大小: | 8057bp |
| 5' 测序引物及序列: | LacI-R：GGCATACTCTGCGACATCGT |
| 3' 测序引物及序列: | -- |
| 载体标签: | N-amyQ |
| 载体抗性: | 氨苄和氯霉素 |
| 筛选标记: | -- |
| 备注: | pHT43载体通过IPTG诱导，能够高水平分泌表达目的蛋白。 |
| 产品目录号: | pBS002 |
| 稳定性: | 瞬时表达 |
| 组成型: | 诱导型 |
| 病毒/非病毒: | 非病毒 |
- BioVector NTCC典型培养物保藏中心
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载体基本信息
载体质粒图谱和多克隆位点信息
载体简介
1.简介
革兰氏阳性菌因其在农业，医疗和食品生物技术和重组蛋白生产等方面的贡献而广为人知。在所有革兰氏阳性菌中，枯草芽孢杆菌载体因下列原因尤为引人瞩目。（一）无致病性，且一般认为安全的有机体；（二）无明显的密码子偏好性；（三）可直接将功能性胞外蛋白分泌到培养基中（目前，大约60％的市售酶由芽孢杆菌生产）；（四）具备包含转录，翻译，蛋白质折叠、分泌机制，遗传操作和大规模发酵的大信息量机体。
但是下述两个障碍减少了枯草芽孢杆菌的使用：（一）产生一定数目的识别并降解外源蛋白的胞外蛋白酶；（二）载体质粒稳定性。第一个障碍已因蛋白酶缺失株的构建而基本解决 。第二个因引入使用θ-复制模式质粒被完全克服，如由天然质粒pAMβ1和pBS72衍生的一些质粒（Jannière等，1990；Titok等，2003）。
最近，基于大肠杆菌 - 枯草杆菌穿梭质粒pMTLBS72的四种不同表达载体的构建和使用展示出全面的结构稳定性，业已出版（Nguyen等，2005）。
两个新的载体pHT01和pHT43允许在细胞质中高水平表达重组蛋白，其中pHT43载体引导重组蛋白到培养基。这两个载体基于强σA-依赖性启动子的枯草杆菌groE操纵子通过添加lac操纵子改造成为一种高效可控的（IPTG诱导的）启动子。pHT01衍生载体可与8×His标签（pHT08），链球菌标签（pHT9）或C - Myc的标签（pHT10）相结合。
2. pHT 载体
所有在枯草芽孢杆菌的groESL操纵子之前使强启动子与lac操纵子融合的载体都可通过加入IPTG进行诱导。尽管当未添加诱导物时表达组件的背景表达水平很低，还是成功从约1300种诱导因子中筛选出一种来使用bgaB报道基因（Phan等，2005）。当分别将htpG和pbpE基因融合到groE启动子时，加入IPTG后，表达的重组蛋白可能分别占细胞总蛋白的10%和13%（Phan等，2005）。热纤梭菌的amyQα-淀粉酶和纤维素酶A、B的高水平表达实验证实。该载体还插入了一个高效SD序列以及一个多克隆位点（BamH I, Xba I, Aat II, Sma I）。编码α-淀粉酶的amyQ基因的信号肽编码区域与pHT01的SD序列融合，构成了pHT43，以此获得分泌的重组蛋白。
载体序列
LOCUS pHT43 8057 bp DNA circular 12-JAN-2014
SOURCE
ORGANISM
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COMMENT VNTAUTHORNAME|biovector.net|
BASE COUNT 2503 a 1584 c 1703 g 2267 t
ORIGIN
1 ttaagttatt ggtatgactg gttttaagcg caaaaaaagt tgctttttcg tacctattaa
61 tgtatcgttt tagaaaaccg actgtaaaaa gtacagtcgg cattatctca tattataaaa
121 gccagtcatt aggcctatct gacaattcct gaatagagtt cataaacaat cctgcatgat
181 aaccatcaca aacagaatga tgtacctgta aagatagcgg taaatatatt gaattacctt
241 tattaatgaa ttttcctgct gtaataatgg gtagaaggta attactatta ttattgatat
301 ttaagttaaa cccagtaaat gaagtccatg gaataataga aagagaaaaa gcattttcag
361 gtataggtgt tttgggaaac aatttccccg aaccattata tttctctaca tcagaaaggt
421 ataaatcata aaactctttg aagtcattct ttacaggagt ccaaatacca gagaatgttt
481 tagatacacc atcaaaaatt gtataaagtg gctctaactt atcccaataa cctaactctc
541 cgtcgctatt gtaaccagtt ctaaaagctg tatttgagtt tatcaccctt gtcactaaga
601 aaataaatgc agggtaaaat ttatatcctt cttgttttat gtttcggtat aaaacactaa
661 tatcaatttc tgtggttata ctaaaagtcg tttgttggtt caaataatga ttaaatatct
721 cttttctctt ccaattgtct aaatcaattt tattaaagtt catttgatat gcctcctaaa
781 tttttatcta aagtgaattt aggaggctta cttgtctgct ttcttcatta gaatcaatcc
841 ttttttaaaa gtcaatatta ctgtaacata aatatatatt ttaaaaatat cccactttat
901 ccaattttcg tttgttgaac taatgggtgc tttagttgaa gaataaagac cacattaaaa
961 aatgtggtct tttgtgtttt tttaaaggat ttgagcgtag cgaaaaatcc ttttctttct
1021 tatcttgata ataagggtaa ctattgccga tcgtccattc cgacagcatc gccagtcact
1081 atggcgtgct gctagcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga agggcgatcg
1141 gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc aaggcgatta
1201 agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc cagtgaattc
1261 gagctcaggc cttaactcac attaattgcg ttgcgctcac tgcccgcttt ccagtcggga
1321 aacctgtcgt gccagctgca ttaatgaatc ggccaacgcg cggggagagg cggtttgcgt
1381 attgggcgcc agggtggttt ttcttttcac cagtgagacg ggcaacagct gattgccctt
1441 caccgcctgg ccctgagaga gttgcagcaa gcggtccacg ctggtttgcc ccagcaggcg
1501 aaaatcctgt ttgatggtgg ttgacggcgg gatataacat gagctgtctt cggtatcgtc
1561 gtatcccact accgagatat ccgcaccaac gcgcagcccg gactcggtaa tggcgcgcat
1621 tgcgcccagc gccatctgat cgttggcaac cagcatcgca gtgggaacga tgccctcatt
1681 cagcatttgc atggtttgtt gaaaaccgga catggcactc cagtcgcctt cccgttccgc
1741 tatcggctga atttgattgc gagtgagata tttatgccag ccagccagac gcagacgcgc
1801 cgagacagaa cttaatgggc ccgctaacag cgcgatttgc tggtgaccca atgcgaccag
1861 atgctccacg cccagtcgcg taccgtcttc atgggagaaa ataatactgt tgatgggtgt
1921 ctggtcagag acatcaagaa ataacgccgg aacattagtg caggcagctt ccacagcaat
1981 ggcatcctgg tcatccagcg gatagttaat gatcagccca ctgacgcgtt gcgcgagaag
2041 attgtgcacc gccgctttac aggcttcgac gccgcttcgt tctaccatcg acaccaccac
2101 gctggcaccc agttgatcgg cgcgagattt aatcgccgcg acaatttgcg acggcgcgtg
2161 cagggccaga ctggaggtgg caacgccaat cagcaacgac tgtttgcccg ccagttgttg
2221 tgccacgcgg ttgggaatgt aattcagctc cgccatcgcc gcttccactt tttcccgcgt
2281 tttcgcagaa acgtggctgg cctggttcac cacgcgggaa acggtctgat aagagacacc
2341 ggcatactct gcgacatcgt ataacgttac tggtttcatc aaaatcgtct ccctccgttt
2401 gaatatttga ttgatcgtaa ccagatgaag cactctttcc actatcccta cagtgttatg
2461 gcttgaacaa tcacgaaaca ataattggta cgtacgatct ttcagccgac tcaaacatca
2521 aatcttacaa atgtagtctt tgaaagtatt acatatgtaa gatttaaatg caaccgtttt
2581 ttcggaagga aatgatgacc tcgtttccac cggaattagc ttggtaccag ctattgtaac
2641 ataatcggta cgggggtgaa aaagctaacg gaaaagggag cggaaaagaa tgatgtaagc
2701 gtgaaaaatt ttttatctta tcacttgaaa ttggaaggga gattctttat tataagaatt
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2821 cgaaagcgga cagtttcgtt cagacttgtg cttatgtgca cgctgttatt tgtcagtttg
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2941 ctaatgagcg ggcttttttc acgtcacgcg tccatggaga tctttgtctg caactgaaaa
3001 gtttatacct tacctggaac aaatggttga aacatacgag gctaatatcg gcttattagg
3061 aatagtccct gtactaataa aatcaggtgg atcagttgat cagtatattt tggacgaagc
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3181 gcgatttgat gttcaaggaa tcacggaaga agatactcat gataaagaag ctctaaaact
3241 attcaataac cttacaatgg aattgatcga aagggtggaa ggttaatggt acgaaaatta
3301 ggggatctac ctagaaagcc acaaggcgat aggtcaagct taaagaaccc ttacatggat
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3541 gctattgata agatggttga gacattacct gagagccaaa aaacttttta tgaatatgaa
3601 ttaaaaaaaa gaaccaacaa aggctgagac agactccaaa cgagtctgtt tttttaaaaa
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3721 tttaaatcca gtaaaaatat gataagatta tttcagaata tgaagaactc tgtttgtttt
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7501 agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt
7561 accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga
7621 gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct
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7741 cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca
7801 cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa
7861 cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt
7921 ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga
7981 taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga
8041 gcgcccaata cgcatgc
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